使用奧林巴斯CX33顯微鏡觀察野生線蟲時，需遵循規范的操作流程并關注關鍵細節，以確保觀察效果并保護設備。以下是具體步驟與注意事項：

一、實驗前準備

顯微鏡檢查與調試

將CX33顯微鏡放置在穩固的實驗平臺上，稍微向左傾斜，距離平臺邊緣約7厘米，確保穩定性。

檢查各部件是否完好，包括目鏡、物鏡（通常配備4×、10×、40×物鏡，觀察線蟲建議使用10×或40×）、光源模塊及電源線。

打開LED光源，調節亮度至適中（建議從低亮度開始逐步增加），避免光線過強導致線蟲應激或觀察不適。

樣本制備

線蟲固定：野生線蟲需先麻醉以減少運動干擾。常用方法包括：

化學麻醉：將線蟲置于含0.1% Levamisole（左旋咪唑）或5mM NaN?的M9緩沖液中，麻醉時間約5-10分鐘。

低溫麻醉：將載玻片置于冰上短暫冷卻（需控制時間，避免線蟲死亡）。

制片：

在載玻片上滴加適量線蟲懸浮液（如M9緩沖液中的線蟲溶液）。

覆蓋蓋玻片時，先讓一側接觸液滴，緩慢放下另一側以避免氣泡產生。

用吸水紙從蓋玻片邊緣吸去多余液體，防止樣本移動。

二、顯微鏡操作步驟

低倍鏡定位

旋轉物鏡轉換器，將10×物鏡對準光孔（物鏡前端與載玻片保持約2cm距離）。

調節粗調焦旋鈕，使載物臺緩慢上升，直到物鏡接近蓋玻片（注意觀察物鏡，防止接觸）。

左眼注視目鏡，反向轉動粗調焦旋鈕，使載物臺緩慢下降，直到視野中出現線蟲輪廓。

輕微轉動微調焦旋鈕，使圖像更清晰，同時移動載物臺（通過X-Y旋鈕）找到目標線蟲。

高倍鏡觀察

在低倍鏡下將目標線蟲調整至視野中心后，旋轉物鏡轉換器，切換至40×物鏡。

由于高倍鏡下視野變暗，需適當增加光源亮度，并調節孔徑光闌（向左或向右移動光闌拉桿，使其指針與物鏡放大倍率匹配），以優化對比度和分辨率。

使用微調焦旋鈕精細對焦，觀察線蟲的形態細節（如體壁、消化道、生殖腺等結構）。

關鍵觀察要點

形態特征：野生線蟲通常體長約1mm，直徑約50μm，需觀察其整體形態（如彎曲程度、體表光滑度）及內部器官結構。

運動行為：若未麻醉，線蟲可能呈現緩慢蠕動或擺動，需記錄其運動模式（如波浪式前進、頭部擺動頻率）。

對比度優化：通過調節孔徑光闌或使用相差環（若配備相差物鏡），增強線蟲與背景的對比度，便于觀察透明結構。

三、注意事項與優化技巧

避免樣本損傷

麻醉劑濃度和時間需嚴格控制，避免線蟲死亡或形態改變（如體腔膨脹）。

蓋玻片壓力要均勻，防止壓碎線蟲或產生人工偽影。

設備保護

操作物鏡轉換器時，避免用手直接握住物鏡旋轉，防止物鏡松動或損壞。

使用高倍物鏡（如40×）時，需先在低倍鏡下定位，再切換至高倍鏡，防止物鏡與載玻片碰撞。

圖像記錄

若需保存觀察結果，可連接數碼相機或圖像采集系統（通過C接口連接三目鏡筒），調整相機參數（如曝光時間、白平衡）后拍攝清晰圖像。

拍攝時保持顯微鏡穩定，避免手部震動導致圖像模糊。

四、應用場景

形態學研究：觀察野生線蟲的種屬特征（如口針形狀、尾端結構），輔助分類鑒定。

行為學分析：記錄線蟲在特定環境（如不同溫度、化學物質刺激）下的運動響應，研究其應激機制。

教學示范：通過實時觀察線蟲形態與行為，幫助學生理解無脊椎動物生物學特性。