cas：149838-22-2，F(xiàn)M 1-43是一種廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的熒光探針，其核心特性、應(yīng)用場(chǎng)景及操作要點(diǎn)如下：

化學(xué)本質(zhì)與基本性質(zhì)

• 化學(xué)名稱：N-(3-三乙基銨丙基)-4-(4-(二丁基氨基)苯乙烯基)吡啶二溴鹽

• 分子量：611.54 g/mol

• CAS號(hào)：149838-22-2

• 外觀：橙色至紅色固體

結(jié)構(gòu)式：

• 溶解性：

• 水溶性：可溶于水，但需注意吸濕性（建議使用新開(kāi)封的DMSO助溶）。

• 有機(jī)溶劑：易溶于DMSO（溶解度可達(dá)50 mg/mL，需超聲助溶并控制溫度<60℃）。

• 儲(chǔ)存條件：

• 短期：4℃密封避光保存（避免反復(fù)凍融）。

• 長(zhǎng)期：-80℃保存（6個(gè)月內(nèi)使用），-20℃保存（1個(gè)月內(nèi)使用）。

熒光特性

• 激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)：

• 溶劑中：Ex 480 nm，Em 626-636 nm（橙紅色熒光）。

• 膜結(jié)合后：Em 565-590 nm（黃色熒光，Stokes位移大，需長(zhǎng)通發(fā)射濾光片）。

• 熒光行為：

• 水溶液中幾乎不發(fā)光，插入細(xì)胞膜后熒光顯著增強(qiáng)。

• 膜結(jié)合后熒光光譜藍(lán)移，便于與背景信號(hào)區(qū)分。

核心應(yīng)用場(chǎng)景

1. 神經(jīng)科學(xué)研究：

• 突觸囊泡循環(huán)：標(biāo)記主動(dòng)釋放神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)元，通過(guò)內(nèi)化進(jìn)入可回收突觸囊泡，實(shí)現(xiàn)神經(jīng)末梢高亮度染色。

• 機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)通道研究：作為毛細(xì)胞機(jī)械傳遞通道的滲透阻滯劑，用于耳毒性機(jī)制研究（如降低氨基糖苷類抗生素的耳毒性）。

• 活性依賴性機(jī)制：結(jié)合KCl刺激法，動(dòng)態(tài)追蹤突觸小泡的釋放與回收。

2. 細(xì)胞生物學(xué)研究：

• 細(xì)胞膜通透性檢測(cè)：通過(guò)熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞膜的通透性和流動(dòng)性。

• 膜電位研究：敏感反映細(xì)胞膜電位變化，用于檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞興奮性和離子通道功能。

3. 成像技術(shù)兼容性：

• 適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀、微孔板讀數(shù)儀等設(shè)備。

實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)

1. 工作液配制：

• 儲(chǔ)備液：用DMSO配制5 mM儲(chǔ)備液（需超聲助溶）。

• 工作液：用預(yù)熱HBSS溶液稀釋至5-20 μM（現(xiàn)用現(xiàn)配）。

2. 細(xì)胞標(biāo)記流程：

• 懸浮細(xì)胞：

• 貼壁細(xì)胞：

1. 培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上，移除培養(yǎng)基后加入100 μL染料工作液。

2. 孵育5-30分鐘后，用培養(yǎng)基洗滌2-3次，成像觀察。

3. 離心收集細(xì)胞，PBS洗滌兩次。

4. 加入1 mL FM 1-43工作液，室溫孵育5-30分鐘。

5. 離心棄上清，PBS洗滌兩次后重懸，用于成像。

3. 非特異性染色去除：

• 標(biāo)記后通過(guò)洗滌（如PBS或培養(yǎng)基）輕松去除細(xì)胞表面非特異性結(jié)合的染料。

4. 固定樣本處理：

• 若需固定樣本，選擇FM 1-43FX（醛類固定劑兼容版本），避免普通FM 1-43在固定過(guò)程中丟失信號(hào)。

注意事項(xiàng)

• 毒性：對(duì)細(xì)胞無(wú)毒，但需避免反復(fù)凍融導(dǎo)致降解。

• 避光操作：熒光探針對(duì)光敏感，所有步驟需在避光條件下進(jìn)行。

• 設(shè)備兼容性：使用典型熒光素（如FITC）或GFP光學(xué)濾光片組，但需注意其發(fā)射光譜與四甲基羅丹明（TRITC）濾光片不兼容。

cas：149838-22-2，F(xiàn)M 1-43

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